Wright●2ME●Coombs Wright ازمایشات سرولوژیک Wright slide agglutination test (rosebengal test) برای تشخیص Acute Brucellosis.سریعترین آزمون سرولوژی اولیه یا غربالی (Screen test) برای تشخیص بیماری تب مالت میباشد. این آزمون بر اساس آگلوتیناسیون مستقیم است و در عرض چند دقیقه میتوان سرمهای مثبت از منفی را شناسایی و جدا کرد. سپس با آزمایش سروآگلوتیناسیون رایت لوله ای باید تیتر آنتی بادی ضد بروسلا را تعیین نمود. آزمایشهای رایت سریع و رایت لوله ای زودتر از سایر آزمایشات سرولوژی در بیماری بروسلوز مثبت میشوند و بیشتر آگلوتینینهای IgM و IgG را شناسایی میکنند. درازمایش رزبنگال مورد مشکوک دیده نمیشود و نتیجه با قاطعیت مثبت یا منفی گزارش میشود. بررسیهای انجام شده نشان میدهد که آزمایش رزبنگال بسیار حساس و نتیجه آن قابل مقایسه با الیزا میباشد. به علاوه آنتی ژن رزبنگال با عامل بیماریهای فرانسیسلاو ویبریوکلرا واکنش متقاطع ندارد و در نتیجه مثبت كاذب در این آزمایش مشاهده نمیشود(برخلاف رایت لوله ای) موارد مثبت باید با روش لولهای تیتر شود و از تیتراسیون آزمایش با پلیت خودداری گردد بهتر است در آزمایش از نمونه های کنترل مثبت و منفی جهت مقایسه آگلوتیناسیون استفاده گردد. Wright tube agglutination test برای تعیین تیترانتی بادی پس از مثبت شدن رایت اسلایدی انجام میشود. در ایران تیتر از ۱:۸۰ و بالاتر مثبت تلقی میشود و نشان دهنده Acute Brucellisis است.تیترهای پائین ۱:۲۰ و ۱:۴۰ نباید کم اهمیت تلقی شوند و اگر با شک بالینی از قبیل درد استخوانی و مفصلی تب و درد عضلانی و کمردرد و... همراه باشند تکرار آزمایش پس از دو هفته توصیه میگردد. البته همراه با تست کومبس رایت به عنوان تست تکمیلی جهت تشخیص Chronic Brucellosis .زیرا در بروسلوز مزمن به علت انتی بادی های ناقصی تست رایت اسلایدی و لوله ای مثبت نمیشود و ازمون کومبس رایت لازم است. نکته :میکروبهای بروسلا با میکروبهای vibrio choleraو Francisella tularensis و واکسن آنها و همچنین Yersinia enterocolitica و Proteous vulgaris ساختمان آنتی ژنی مشترک دارد. بنابراین عفونت با این میکروبها میتواند سبب افزایش تیتر آگلوتینینهای ضد بروسلا در آزمایش رایت لوله ای شود.ضمنا سرم خون افراد معتاد به داروهای خواب اور و افراد مبتلا به بیماری مزمن کبدی گاهی حساسیت غیر اختصاصی با انتی ژنهای سالمونلایی نشان میدهد. نکته :مشکل عمده آزمایش رایت این است که بعد از درمان تا مدت ها در تیتر قابل قبول مثبت باقی میماند در این گونه موارد، در صورتی که تیتر آنتی بادی در مقایسه با آزمونهای قبلی، سیر نزولی داشته باشد یا آزمایش 2MEمنفی شود دلالت بر تأثیر درمان یا بهبودی میباشد. افرادی که به دلیل شغلی در تماس مداوم با میکروب بروسلا میباشند مانند دامپزشکان دامداران و یا کارکنان کشتارگاه ها سیستم ایمنی آنها دائما تحریک شده و آنتی بادی تولید شده در سرم آنها بیشتر از کلاس IgG است. تیتر سرم این افراد اغلب به 1/320 و گاهی بیشتر می،رسد ولی علائم بالینی بیماری در آنها دیده نشده و مبتلا به بیماری محسوب نمی گردند. گاهی به علت پدیده منطقه ای پرو-زون (Pro-Zone آزمایش رایت در غلظتهای زیاد سرم ممکن است منفی یا تیتر صحیح معلوم نشود. در چنین وضعیتی باید سرم را رقیق تر کرد و آزمایش رایت را انجام داد. 2ME test برای تعیین اکتیویتی بیماری پس از مثبت شدن رایت رپید انجام میشود. در بروسلوز با درمان مناسب تیتر IgG کاهش یافته ولی تیتر IgM از 6 ماه تا 2 سال ممکن است دوام داشته باشد. برعکس سایر بیماریها که معمولا IgG برای مدت طولانی تری باقی میماند و IgM پس از درمان سریع کاهش می یابد . در آزمایش 2ME آنتی بادی IgM از بین رفته و بدین وسیله آنتی بادی IgG که نشان دهنده مرحله فعال بیماری است اندازه گیری می شود. معمولاً تیتر قبل از درمان ۱:۴۰ به بالا در این آزمایش مثبت تلقی میشود. مثبت شدن تست 2ME نشاندهنده ی عفونت فعال در Acute Brucellosis است. گاهی ممکن است آگلوتینینهای مادری در سرم نوزادان کمتر از ۶ ماه، سبب مثبت شدن آزمایشهای ،رزبنگال سروآگلوتیناسیون رایت و2ME شوند. این آنتی بادیها از کلاس IgG میباشند که از جفت عبور میکنند. در این گونه موارد برای اثبات بیماری تب مالت نوزاد باید نتایج آزمایش2ME با سروآگلوتیناسیون رایت لوله ای مقایسه شوند. اگر نتیجه آزمایش 2ME کمتر از آزمایش رایت لوله ای شد، احتمالاً این کاهش تیتر مربوط به کلاس IgM میباشد که در مجاورت 2ME از بین رفته است. و این اختلاف نشان دهنده ی وجود آنتی بادی IgM علیه میکروب بروسلا در ،نوزاد، و دلالت بر بیماری تب مالت نوزاد میباشد . در صورتی که تفاوتی بین تیتر این دو آزمایش مشاهده نشد نوزاد مبتلا به تب مالت نمیباشد و علت مثبت شدن این دو آزمایش آنتی بادی IgG مادری میباشد. Coombs wright test برای تشخیص Chronic Brucellosis پس از منفی شدن رایت رپید.در بروسلوز مزمن و طول کشیده ممکن است به جای IgM و زیر کلاسهای G1 وG2که بیش از ۸۰ درصد IgG موجود را تشکیل میدهند بیشتر G3 و G4 و IgAتشکیل میشوند که ازنظر کمی و کیفی ضعیف تر و non-agglutinin IgG هستند. این آنتی بادیها در تست رایت نتیجه ی منفی کاذب به وجود می آورند ولی در تست کومبس رایت نتیجه مثبت خواهد شد. در تست کومبس رایت تیتر ۱/۴۰ و بالاتر ارزش تشخیص داشته وجود علائم بالینی نتیجه را با ارزش میکند اگر آزمایش رایت بیماری منفی شود در صورتی که درخواست کومبس رایت داشته ،باشد آزمایشگاه برای آن بیمار تیتراسیون کومبس رايت را انجام خواهد داد ولی ME وی را بدون انجام دادن، منفی گزارش خواهد کرد چون فعال بودن مربوط به بیماری حاد است. ازمایشات الایزا برای تمایز بروسلوز از عفونتهای دیگری که باعث نتایج مثبت کاذب میشوند میتوان از روش الایزا استفاده کرد در این روش آنتی بادیهای IgM و IgG علیه بروسلا اندازه گیری میشوند. در یک مطالعه بالینی نشان داده شده است که حساسیت ELISA به IgG یا IgM کمتر از SAT است به ترتیب ۴۵ و ۷۹ (درصد اما درصورتیکه این دو ایمونوگلوبولین همراه باهم سنجیده شوند الایزای IgG و IgM) حساسیت و اختصاصی بودن تست به میزان قابل توجهی افزایش پیدا میکند به) ۹۴ و ۹۷ درصد میرسد. ازمایشات کشت بافت یکی از روشهای تشخیصی است که به دوشکل کشت خون و کشت مغز استخوان انجام می.شود حساسیت کشت خون برای تشخیص بروسلوز بین ۱۵ تا ۷۰ درصد است. زمانی که بیماری مزمن باشد کشت خون منفی میشود که از نقایص این روش است. اما کشت مغز استخوان نسبت به خون حساس تر بوده و به عنوان استاندارد طلایی (gold standard برای تشخیص بروسلوز محسوب می.شود در یک مطالعه شامل ۵۰ بیمار مبتلا به بروسلوز، کشت مغز استخوان در ۹۲% موارد مثبت بوده است
