ASO●TB●Mycoplasma

ASO روش اسلایدی(کیفی)

تست غربالگری سریع و بر اساس آگلوتیناسیون پاسیو می باشد. در این روش ذرات لاتکس حساس شده با استرپتولیزین 0 در برخورد با سرم دارای ASO آگلوتینه می گردد که در صورت مثبت بودن برای تعيين ASO تیتر در سرم روش لوله ای انجام می دهیم.

دقت ۱: سرم باید تازه تهیه شده باشد. دقت ۲: برای انجام تست راپید از کنترل های مثبت و منفی استفاده می کنیم.

ASO روش لوله ای(کمی)

1- سرم بیمار را به رقت های زیر در سه لوله آزمایش ۱۶۸۱۱۰ میلی متری به وسیله بافر آنتی استرپتولیزین 0 تهیه نمائید. لوله اول: رقت ۱:۱۰ برای این کار

۱.۵

سانتیمتر مکعب سرم بیمار را با ۴.۵

سانتیمتر مکعب بافر مخلوط نمائید. (چون تیتر آن بسیار پایین و در رنج نرمال است می توان از آزمایش با آن صرف نظر کرد) لوله دوم: رقت ۱:۱۰۰ مقدار ۱ سانتیمتر مکعب از سرم

۱:۱۰ رقت را با ۹ سانتیمتر مکعب بافر مخلوط نمائید. لوله سوم: رقت ۱:۵۰۰ مقدار ۲ سانتیمتر مکعب از رقت

۱:۱۰۰ سرم را با ۸ سانتیمتر مکعب بافر مخلوط نمائید. ۲- سرم کنترل مثبت. در صورتی که کیت آزمایشگاهی هایلند (Hyland) را در اختیار دارید، پودر لیوفلیزه سرم کنترل را در ۱۰ سانتیمتر مکعب آب مقطر حل نموده تا تیتر

۱:۱۰۰ را به شما بدهد. از این سرم رقت های مختلف را مانند سرم بیمار مطابق جدول در ۵ لوله ۱۳x۱۰۰ میلی متری تهیه نمائید. ۳- در یک جا لوله ای، ۱۴ لوله آزمایش ۱۳x۱۰۰ میلی متری را برای هر بیمار قرار داده و به آن ها مقادیر مختلف بافر ASO مطابق جدول اضافه نمائید. ۴- به لوله های ۱ تا ۱۲ مقادیر مختلفی از رقت های

۱:۱۰، ۱:۱۰۰ و

۱:۵۰۰ سرم بیمار را مطابق جدول اضافه کنید. دو لوله آخر به عنوان کنترل گلبول های قرمز و استرپتولیزین 0 می باشند و سرم بیمار به آن ها اضافه نمی شود. سپس لوله ها را به آرامی تکان داده تا مخلوط شوند. ۵- پودر استرپتولیزین 0 را در مقدار معینی آب مقطر که روی شیشه نوشته شده حل نموده (سم استرپتولیزین 0) و مقدار ۱.۵ سانتیمتر مکعب از آن را به تمام لوله ها به جز لوله ۱۳ اضافه نمائید.

 ۶- لوله های آزمایش را همراه با جا لوله ای به آرامی تکان داده تا مخلوط شوند و سپس جا لوله ای را در بن ماری و یا گرم خانه ۳۷ درجه سانتی گراد به مدت ۱۵ دقیقه بگذارید. ۷- جا لوله ای را از بن ماری یا گرم خانه درآورده و به تمام چهارده لوله آزمایش مقدار

۱.۵ سانتیمتر مکعب سوسپانسیون پنج درصد گلبول های قرمز خرگوش و یا گروه خونی 0 انسان اضافه نمائید. لوله ها را به آرامی تکان داده تا مخلوط شوند. سپس آن ها را در بن ماری یا گرم خانه ۳۷ درجه سانتی گراد به مدت ۴۵ دقیقه قرار دهید. لازم است در ۱۵ دقیقه اول بعد از قرار دادن آن ها در حرارت ۳۷ درجه لوله ها را یک بار تکان دهید.

 ۸- لوله ها را از بن ماری یا گرم خانه بیرون آورده و آن ها را به مدت یک دقیقه در ۱۵۰۰ دور در دقیقه سانتریفیوژ نمائید. ۹- پس از سانتریفیوژ، نتیجه? آزمایش را خوانده و گزارش نمائید.

قرائت نتایج: لوله ها را یک به یک با شاهدها مطابقت می دهیم، آخرین لوله ای که هیچ لیزی در RBC های آن مشاهده نشد تيتر سرم آن به عنوان تیتر آزمایش گزارش می شود. در صورت مشاهده ی لیز ناقص، لوله ی قبلی به عنوان تیتر سرم گزارش می گردد.

 واحد گزارش تیتر Todd است. تاد (Todd): مقداری از آنتی بادی که بتواند

۲.۵

دوز حداقل همولایتیک را خنثی کند.

نکته: برای محاسبه تیتر آنتی-استرپتولیزین 0 در هر لوله به مثال زیر توجه نمائید. مثلا مطابق جدول به لوله شماره ۲ مقدار

۰.۲ سانتیمتر مکعب از سرم ۱:۱۰ رقت ریخته اید و به این لوله مقدار

۰.۸

سانتیمتر مکعب بافر اضافه نموده اید، بنابراین حجم کل آن ها یک سانتیمتر مکعب و تیتر نهائی این سرم مطابق معادله زیر محاسبه می شود.

0.2 ml (1:10) = 1 ml (1:x)

X= 50 Todd's units